NanoTemper Technologies公司Prometheus NT.48蛋白质稳定检测，采用nanoDSF技术，测量蛋白稳定性，具有超高分辨率。
 

 
       nanoDSF是一种先进的差示扫描荧光技术，具有超高分辨率，利用蛋白中色氨酸和酪氨酸自发荧光检测其稳定性。它广泛应用于抗体工程、膜蛋白研究、制剂和质量控制等领域。采用 nanoDSF 技术，简单、快速、准确地分析蛋白折叠和稳定性。

       完全无标记，仅通过检测色氨酸和酪氨酸自发荧光的变化即可分析蛋白的化学和热稳定性。基于无可比拟的扫描速度和数据点密度，NanoTemper的双UV技术可动态检测荧光变化，获得具有超高分辨率的去折叠曲线。数据不受样品聚集的影响，甚至可以检测到瞬间的去折叠信号。

      由于无需外加荧光染料，蛋白样品测试不受缓冲液的限制，其浓度可上达250 mg/ml，下至5 ug/ml。因此适用于研究含去垢剂的膜蛋白和高浓度的抗体制剂。
背向反射法测定蛋白聚集

      Prometheus NT.48 (PR NT.48) 可在 15 - 95°C 范围内同时持续加热处理多达 48 个样品，升温速率可在 0.1 - 7°C/min 按需调整，并同时收集样品的荧光和背向反射信号。因此，样品的聚集起始温度和对应的熔融温度可在多达 48 种不同的条件下同时测定。此外，聚集信号表明样品在去折叠状态的聚集倾向，是生物制剂长期稳定性的重要参数。

      PR NT.48 利用背向反射光学原理检测蛋白的聚集。光穿过载有目标蛋白的毛细管。如果没有发生蛋白聚集，所有入射光穿过毛细管并被毛细管托盘反射，监测到的信号由检测器定量；如果蛋白样品含有聚集颗粒，入射光则被散射。通过检测损失掉的光信号，蛋白样品的聚集得以精确测定。
化学变性和热变性
 

      热变性和化学变性广泛应用于量化蛋白结构稳定性。热变性是监测在持续稳定升温条件下蛋白构象随时间的变化，而化学变性则研究蛋白在变性剂作用下的去折叠过程。

      大多数蛋白的热变性发生在一个较窄的温度范围内。蛋白从折叠到去折叠转变过程的中点被称为熔融温度，即Tm值。它是衡量蛋白稳定性的一个重要参数。热变性实验可对大量样品快速平行进行，因而特别适用于蛋白工程、制剂开发和筛选等研究。

      除了热变性实验之外，类似的去折叠曲线也可以通过化学变性测试获得，进而反映蛋白折叠和去折叠过程中的热力学参数和平衡信息。

内源荧光检测去折叠

      蛋白中色氨酸和酪氨酸荧光受其所在微环境的影响很大，尤其是色氨酸荧光，蛋白结构的变化通常会影响其强度和发射波长。PR NT.48 仪器配备的荧光检测器可测定样品在两种波长（350 nm 和 330 nm）下的荧光强度，因而可以灵敏的检测到蛋白去折叠过程中荧光强度和荧光峰值的变化。

      通过变性曲线可以得到蛋白稳定性的重要参数。衡量目标蛋白的热稳定性可通过参数熔融温度（Tm），即一半蛋白去折叠时的温度。Tm值可根据色氨酸单荧光强度变化计算，也可以通过色氨酸在 330nm 和 350nm 发散波长下荧光比值计算。

      通过 F350 / F330 比值所获得的数据通常可以清晰的描述蛋白去折叠的转变过程，但有时单波长的检测数据并不能导出 Tm 值，而 PR NT.48 双波长检测系统则可以灵敏检测蛋白的去折叠过程。

技术特征

1. 天然的 DSF – 无需染料，可在任意缓冲液和去垢液中进行测试

2. 超高分辨率：每3秒钟可测试48根毛细管

3. 同时检测蛋白去折叠和聚集情况

4. 检测范围广泛：蛋白浓度从5 µg/ml 到 > 250 mg/ml

5. 温度范围：从15°C到 95°C

6. 热变性和化学变性