FITC Annexin V/PI Apoptosis Detection Kit

产品英文名（Product Name）

FITC Annexin V/PI Apoptosis Detection Kit

产品描述（Description）

细胞凋亡是胚胎发育和为维持内环境稳定，由基因控制的细胞自主的有序的死亡的一种正常生理过程。它是细胞正常生理活动的一部分，包括细胞膜不对称性和附着性丧失、细胞质和核质浓缩、核小体间DNA断裂。细胞膜的破坏是细胞凋亡的早期特征。在正常细胞中，磷酯酰丝氨酸（PS）只分布在细胞膜脂质双层的内侧，而在细胞凋亡的早期，细胞膜中的磷酯酰丝氨酸（PS）由质膜内侧翻向外侧，从而将PS暴露于细胞外部环境。Annexin V是一种35-36KD的Ca2+依赖性磷脂结合蛋白，与PS具有高度亲和力，故可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞的细胞膜结合。因此，Annexin V被公认为检测细胞早期凋亡的灵敏指标之一。

碘化丙啶（Propidium， PI）是一种核酸染料，PI不能透过正常细胞或早期凋亡细胞的完整细胞膜，但可穿透膜损伤的细胞如晚期凋亡细胞或坏死细胞的细胞膜并与其内的DNA结合，使细胞核着染上红色。因此，将Annexin V与PI共染，则可以区分不同凋亡时期的细胞。本公司生产的细胞凋亡试剂盒将Annexin V以绿色荧光FITC进行标记，标记后的Annexin V保留了与PS的高亲和力，可作为探针，利用荧光显微镜或流式细胞仪进行细胞早期凋亡检测。联合可检测细胞晚期凋亡或死细胞的红色核酸染料PI则可以很好的将处于不同凋亡时期的细胞核死细胞区分开来。在双色流式细胞散点图上，Annexin V-FITC与PI双阴性为正常细胞群，Annexin V-FITC阳性、PI阴性为早期凋亡细胞群，Annexin V-FITC与PI双阳性为晚期凋亡细胞或坏死细胞群。

储存条件（Storage）

2-8℃避光保存

运输方式（Shipping）

冰袋运输

使用方法（Standard Operating Procedure）icon

1.实验前准备

（1）1x磷酸缓冲液PBS；

（2）凋亡诱导剂；

（3）去离子水；

2.样品预处理

2.1 样品染色

（1）根据实验要求诱导细胞凋亡。检测样品中应包含未经处理的细胞样品，作为阴性对照。此外，进行流式检测时需取实验组分别进行Annexin V-FITC和PI单染，用于调节补偿；

（2）收集细胞。

  悬浮细胞：1000rpm、4℃离心5min，弃培养基上清；

  贴壁细胞：用不含EDTA的胰酶消化细胞，终止消化后收集，1000rpm、4℃离心5min，弃上清；

（3）洗涤细胞。用预冷的PBS洗涤细胞2次，每次均在1000rpm、4℃离心5min，弃上清；

（4）配制1x Annexin V-binding buffer。用去离子水按照1:5体积比稀释5xAnnexin V-binding buffer备用；

（5）细胞重悬。加入100 μl 1x Annexin V-binding buffer，轻轻吹匀至单细胞悬液；

（6）细胞染色。加入5 μl Annexin V和5 μl PI Staining Solution，轻轻吹匀，置于室温避光孵育5-10min，再加入400 μl 1x Annexin V-binding buffer，轻轻混匀重悬。在1h内上流式细胞仪进行检测分析或荧光显微镜观察分析。 

2.2 样品分析

2.2.1 荧光显微镜分析

（1）将已染色重悬的细胞滴一滴在载破片上，并用盖破片盖上细胞；

  针对贴壁细胞可以直接接爬片让细胞直接生长在爬片上进行诱导及染色处理；

（2）置于荧光显微镜下用双色滤光片观察：Annexin-V-FITC荧光信号呈绿色，PI荧光信号呈红色。

2.2.2 流式细胞仪分析

（1）流式细胞仪检测激发波长488nm，FITC的绿色荧光采集通道FL1通道检测；PI的红色荧光采集通道PI通道或FL2或FL3通道检测，建议使用FL3通道，每个样本采集10000个事件；

（2）荧光补偿调节。使用未经凋亡诱导处理的正常细胞，作为对照进行荧光补偿调节去除广谱重叠与设定十字门的位置。在双色流式细胞散点图上，Annexin V-FITC与PI双阴性为正常细胞群，Annexin V-FITC阳性、PI阴性为早期凋亡细胞群，Annexin V-FITC与PI双阳性为晚期凋亡细胞或坏死细胞群。

3. 应用案例（流式细胞术检测喜树碱诱导Jurakt细胞凋亡）

分别用2.0、10 μM喜树碱（Camptothecin， CPT）诱导Jurkat细胞（人T淋巴瘤细胞株）4h收集细胞进行流式凋亡检测。参照产品说明书进行相关染色操作并用流式细胞仪进行凋亡检测，结果如下图。

（A）0μM对照组. （B）2.0μM实验组. （C）10μM实验组. 其中

产品实验图片icon

组分&说明（Component & Instruction）icon