在生命科学领域中,生物分子间的相互作用具有非常重要的作用。通过对分子间相互作用分析,不仅可阐明细胞生物学事件,而且为疾病发生机制和药物发现提供基础。微量热泳动(microscale thermophoresis,MST)是一种分析生物分子相互作用的技术。MST技术是一种基于检测在温度梯度中的生物分子电泳迁移率的变化而检测生物分子间结合、解离过程,获取分子间相互作用的模式和动力学常数等方面信息的新技术,是近年来发展的研究生物分子相互作用的强有力工具,已广泛应用于药物筛选、信号转导、分子检测和医学诊断等生命科学领域。MST是一种表征生物分子特性的光学方法,是粒子在微观温度梯度中的定向运动。将其中一个互作分子(大多是蛋白)标记荧光染料或者融合GFP标签,将标记蛋白和配体分子按照特定的浓度梯度置于毛细管中,红外激光加热产生一个微观的温度梯度场发生热泳动,其水化层、分子大小、电荷等分子性质会随着热泳动发生改变,进而引起反应体系中荧光分布的变化。②需固定样品,且样品用量较小,ug级别就能开展检测;③无需使用抗体,无需获得高纯度蛋白,直接使用Tris-NTA dye标记His-Tag融合蛋白,即可上机进行检测;④能够测量复杂生物溶液(细胞裂解物、血清、洗涤剂、脂质体等);⑥不仅能定性两个生物分子的互作关系,还可以定量判断结合的亲和力强弱。1、蛋白-小分子相互作用分析(蛋白酶与抑制剂、细胞膜蛋白活性)2、蛋白-蛋白相互作用分析(包括抗原-抗体、分子伴侣-底物)
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