BLI技术在小分子互作分析的应用案例

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BLI技术的动力学分析可用于检测相互作用的亲和力以及可逆的非共价结合的结合常数(kon)、解离常数(koff)以及亲和力常数(KD)。典型的非共价结合由静电作用、氢键、范德华力和疏水作用组成。分子之间的特异性相互作用对生物学的许多过程以及药物研发至关重要。 
凭借高通量、非标记、实时定量且无液路的特点,Octet®在大分子相互作用分析和生物药研发领域具有突出优势。越来越多的高分文献及应用实例证明了BLI技术在小分子、化合物片段、未知样品垂钓、竞争分析等应用中表现优异,传感器分析模式也更容易开发灵活和创意的检测方案。
BLI技术在小分子互作分析的应用案例 BLI技术用于片段化合物筛选 基于生物传感器的片段化合物筛选是药物研发过程中一个非常具有价值的工具。这种方法优于许多其他的生化方法,因为苗头化合物可有效地通过具体的结合图谱以及响应值从非特异性或非理想的相互作用中区分开来,从而降低假阳性。BLI技术通过监测生物分子结合导致的光的干涉图谱的变化实现分子间的相互作用的实时检测。 
Charles A. Wartchow等将重组表达纯化得到AVI-Tag生物素标记的蛋白或通过体外的方式标记生物素(biotin-LC-LC-NHS)固化至链酶亲和素传感器上。通过缓冲液建立基线噪音信号,以基线噪音信号的3倍标准差为阈值筛选苗头化合物。使用了包含6500种化合物的片段文库,以BCL-2、JNK1、eIF4E等蛋白为靶点进行了筛选,比较了这些靶点的苗头化合物的比率。
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图1 根据化合物的信号值筛选苗头化合物
 Francesca E. Morreale等同时使用差示扫描荧光(DSF)和BLI技术筛选E2泛素连接酶Ube2T的抑制剂。将Ube2T固化在链霉亲和素传感器上,对片段库的化合物进行筛选。利用DSF方法筛选出4种化合物,而采用BLI方法也筛选出4种化合物,其中有2种是同时用两种方法都筛选了出来。所有六种化合物用核磁共振(NMR)进行了验证并确认这些化合物在靶点蛋白上的结合位点。