微量热泳动(MicroScale Thermophoresis,MST) 是一种定量分析生物分子间相互作用的前沿技术。
通过精确检测荧光变化,结合灵敏的热泳动现象,MST 提供了一种灵活、强大和快速测量分子间相互作用的方法。
微量热泳动(MST)检测分子在微观温度梯度场中的运动,探测其水化层、电荷以及分子大小的变化。
MST将荧光检测的精准性与热泳动的灵活性及灵敏度结合起来,快速、可信地检测分子间相互作用。
图1 实验示意图
从分子对接分析表明,葛根素和槲皮素与ACE2具有良好的结合亲和力,研究者并通过表面等离子体共振(SPR)验证了这一点。
MST 测试时,由红外激光建立微观温度梯度场,通过荧光染料标记、荧光融合蛋白、色氨酸自发荧光等信号追踪,分子在微观温度梯度场中的定向移动就可以被探测和量化。
MST 应用范围广泛,可用于检测小分子之间、蛋白和蛋白之间、多蛋白复合物之间的相互作用。
MST 在缓冲液中操作,无需任何表面固定,因此即使对于体积较大、不稳定的样品,比如脂质体、纳米材料或者膜蛋白,也同样适用。
亲和力检测:(Kd,解离常数)pM/nM 至 mM
样品种类:蛋白、多肽、核糖体、离子、核小体、脂质体等
可直接在脂质体或去垢剂溶液中测试膜蛋白
适于复杂体系研究,如三聚体组装、蛋白组装方式、抑制效应、协同效应
可在任意缓冲液中测试,包括含有复杂去垢剂的混合液
可在生理条件下,如在血清、细胞裂解液中检测相互作用
蛋白寡聚化研究
蛋白聚集检测
结合能研究、ΔG(自由能)、ΔH(焓)和ΔS(熵)